人工培养动物细胞的优点有哪些
能够方便地控制实验因素。易于观测实验结果。可供研究的细胞种类极其广泛。可同时提供大量均一性较好的细胞群,降低实验成本。能够进行大规模生物制品的生产。细胞培养方式大致可分为两种:一种是群体培养(massculture),将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中,让细胞贴壁生长,汇合(confluence)后形成均匀的单细胞层。另一种是克隆培养(clonalculture),将高度稀释的游离细胞悬液加入培养瓶中,各个细胞贴壁后,彼此距离较远,经过生长增殖每一个细胞形成一个细胞集落,称为克隆(clone)。一个细胞克隆中的所有细胞均来源于同一个祖先细胞。此外,为了制取细胞产品而设计了转鼓培养法,使用大容量的圆培养瓶,在培养过程中不断地转动,使培养的细胞始终处于悬浮状态之中而不贴壁。
动物细胞培养原理
动物细胞培养的原理是细胞增殖,动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。
一、细胞增殖的意义:
1、细胞增殖是生物繁殖的基础:单细胞生物以细胞分裂的方式产生后代;多细胞生物的繁殖和发育的基础、
2、细胞增殖是高等生物完成正常生命活动的基础:细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。
二、细胞通过分裂进行增殖:
细胞增殖是细胞重要的生命活动,是生物体生长、发育、繁殖、遗传的基础。
1、单细胞生物:细胞增殖而繁衍。
2、多细胞生物:从受精卵开始,要进行细胞的增殖和分化逐渐发育成个体。
3、真核细胞的分裂方式:有丝分裂、无丝分裂、减数分裂。
动物细胞培养需要在什么条件的培养箱中培养?
一、培养细胞生长的条件
1、细胞的营养需要
2、细胞的生存环境
温度: 37 ℃
O2
CO2: 5% CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3-
pH: 7.2-7.4
渗透压
3、无污染
4、无毒
二、CO2培养箱及使用注意事项
1、 CO2培养箱设定的条件为37 ℃,5% CO2 。
2、使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题:
①用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶盖微松,以保证通气。
②保持培养箱内空气干净。定期消毒(90 ℃ ,14 h)。
③箱内加灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏水于槽中以保持箱内湿度,避兔培养液蒸发。
细胞培养是要适宜的pH的,一般培养基中会加入Na2HCO3,根据培养箱中CO2浓度不同达到适宜的pH。如果只是培养成纤维类等比较好养的细胞,而且只是培养2~3天观察生长,不做后续实验的话,在普通培养箱中凑合一下也可以。但是长期培养的话,细胞状态慢慢就不好了,如果是比较娇贵的细胞,有可能根本养不了。
动物细胞培养基中添加饲养细胞的的作用?
添加饲养细胞的作用是促进细胞的发育。动物细胞培养(animal cell culture)就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞(使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶)然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。细胞培养是指细胞在体外条件下的生长,动物细胞在单独细胞培养的过程中不再形成个体。体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同,例如,需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基,称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境,因此在使用合成培养基时,通常需加入血清、血浆等一些天然成分。
动物细胞培养的条件
动物细胞培养的条件如下:1、无菌、无毒的环境对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。2、营养物质无机物(无机盐、微量元素等),有机物(糖、氨基酸、促生长因子等)。血清和血浆(提供细胞生长必须的营养成份)3、温度和气体环境温度和pH(36.5±0.5℃,7.2至7.4);气体环境(95%的空气+5%CO₂的混合气体)其中5%CO₂气体是为保持培养液的pH稳定。4、培养液成分体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同,例如,需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基,称为合成培养基。动物细胞培养分类:1、原代细胞将动物各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,在合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。培养的细胞为正常的动物细胞,一般培养10代后不再增殖,死亡。2、传代细胞传代培养是细胞培养常规保种方法之一,也是所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶,细胞才能继续生长,这一过程就叫传代。传代培养可获得大量供实验所需细胞。细胞传代要在严格的无菌条件下进行,每一步都需要认真仔细地无菌操作。培养的细胞为癌变或人为癌化的细胞,理论上可以无限增殖。癌化的方式有很多:进行癌基因突变,感染病毒,从癌症供体体内分离,物理或化学方法(如紫外,化学试剂)等。
动物细胞培养的基本过程
一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试。二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而定),经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后接入培养器皿中,这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养,实际上幼体组织(尤其是胚胎组织)比成年个体的组织容易培养,分化程度低的组织比分化高的容易培养,肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理,尽快培养,因故不能马上培养时,可将组织块切成黄豆般大的小块,置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌,同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌,为减少污染可用抗菌素处理。三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养,则直接将组织块接入培养器皿底部,几个小时后组织块可贴牢在底部,再加入培养基。如系细胞培养,一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数,按要求以一定的量(以每毫升细胞数表示)接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后,立即放入培养箱中,使细胞尽早进入生长状态。正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次,观察的内容包括细胞是否生长良好,形态是否正常,有无污染,培养基的PH是否太酸或太碱(由酚红指示剂指示),此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期(数小时到数十天不等),在潜伏期细胞一般不分裂,但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养,将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代,而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质,也可能仅有不死性(Immortality)而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。四、冻存及复苏为了保存细胞,特别是不易获得的突变型细胞或细胞株,要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—-196℃,将细胞收集至冻存管中加入含保护剂(一般为二甲亚砜或甘油)的培养基,以一定的冷却速度冻存,最终保存于液氮中。在极低的温度下,细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法,即从液氮中取出冻存管后,立即放入37℃水中,使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。扩展资料:进入细胞间开始细胞培养时,注意事项:①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题,不确定的溶液和耗材请勿使用,除非特殊情况,不要借用别人的溶液。②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。③确定酒精灯内的酒精量,需要的话及时进行补充。④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖,实验开始前可以把所有瓶盖旋松。⑤尽量不要直接倾倒溶液,除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败,溶液粘在瓶口,请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围(不要接触到瓶口)后在火焰上简单烧灼。⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的,必须及时更换。⑦实验完毕及时收拾,保持工作区域清洁整齐,最后用75%酒精清洁台面。参考资料来源:百度百科-细胞培养